电子娱乐网站

Mirus全能型转染试剂:TransIT-X2?应对多种核酸/蛋白及细胞类型

基于需要递转不同种类核酸/蛋白类型研究,在细胞转染环节,研究者们常碰到如下类问题:

  1. 细胞对化学试剂较为敏感,转染后,细胞活率下降或死亡;
  2. 研究常用细胞类型较多,不同类型细胞,转染效率差异较大,导致单个转染试剂或者实验流程,无法满足实验需求;
  3. 递转多种类型核酸或蛋白,需要挑选对应的转染试剂,并且需要大量实验优化,才可以得到较高的转染效率。

有没有一款化学转染试剂,可以同时应对常规到转染细胞类型,有着较低的细胞毒性,并且适用于多种核酸/蛋白类型递转呢兼具多重功能、高性能的TransIT-X2®转染试剂,可同时应对常见细胞及难转染细胞类型,避免条件摸索大量的重复性实验,轻松得到您理想的实验结果。

  • 已验证大多数细胞类型中如贴壁/悬浮细胞、原代细胞、神经细胞等,有着优异的转染效率、低毒性(特别相对于形成脂质体复合物的Lipofectamine®系列试剂、高性能的表现
  • 适用于多研究领域,包括不限于干细胞研究、基因编辑CRISPR研究、RNAi基因干扰/沉默、稳转细胞株构建、低毒性的转染实验、共转染实验等;
  • 允许高效且稳定的同时递转多种核酸/蛋白类型,包括不限于质粒 DNA、siRNA/miRNA CRISPR/Cas9 组分。

为什么Mirus TransIT-X2® Dynamic Delivery System有着如此高性能广泛适应性呢?这归因于Mirus强大高效的专利递转平台设计,可进行多重、多功能组合的转染试剂组分筛选并优化。成立于1995年的Mirus,专注及深耕核酸递转领域多年(图1,从最早具有低毒性的TransIT ® -LT1GMP级别、可用于AAVLV生产的TransIT-VirusGEN®,都是基于递转平台进行设计及开发。截至目前,使用Mirus产品发表文章已超过1万篇,并且发表文章及Mirus数据库涵盖了超过1200细胞类型,更多文章及数据查询,请点击这里。

1 Mirus产品年鉴

 

不同于传统基于单组分的转染试剂(如阳离子聚合物或阳离子脂质体),为了进一步提高转染效率,以应对不同细胞类型或特定的应用。Mirus将专利的多聚物(Polymer)及脂质(Lipids)技术进行多重组合,不形成脂质体复合物(即liposome,通常具有细胞毒性)前提条件下,得到多种类、高性能的转染方案,克服细胞递转过程中的多重阻碍,以实现更高效转染和更低的细胞毒性(图2。

2 Mirus转染试剂原理示意图

 

基于上述Mirus强大、高效的专利递转平台设计,在进行多重、多组合筛选、优化及后续验证,独有的智能迭代设计流程,优化转染技术中的每个组分(图3。Mirus推出一系列经典转染试剂,以应对多种需求:

  1. 广谱、高性能、低毒性的转染试剂家族: TransIT-X2®、TransIT®-LT1、TransIT®-2020
  2. 针对特定细胞类型的转染试剂家族:TransIT®-293、TransIT®-BrCa、TransIT®-CHO、TransIT-HeLaMONSTER®、TransIT®-Insect、TransIT®-Jurkat、TransIT®-Keratinocyte
  3. 针对特定应用的转染试剂家族:

-      病毒生产:VirusGEN® 转染试剂及配套试剂盒、TransIT®-Lenti

-      蛋白/抗体生产:TransIT-PRO®、CHOgro® Expression System、CHOgro® High Yield Expression System

  1. 寡核苷酸递转的转染家族:TransIT®-Oligo、TransIT-siQUEST®、TransIT-TKO®
  2. mRNA及长链RNA递转:TransIT®-mRNA

3 Mirus独有智能迭代设计,转染试剂优化流程示意图

 

 

Mirus TransIT-X2®转染试剂性能数据展示

A graph of red columns Description automatically generated

Mirus TransIT-X2®Dynamic Delivery System递转表达EGFP质粒DNA分别至A549、CHO-K1、Hep G2、MDCK、LNCaP、PC-12、原代人乳腺上皮细胞(HMEC)和正常人真皮成纤维细胞(NHDF)细胞中。实验使用96孔板, TransIT-X2®试剂加入量为0.2-0.4?l,DNA加入量为0.1?g(使用试剂:DNA=2:1、3:14:1)。转染后48小时,使用Guava® easyCyte? 5HT流式细胞仪重复检测三次,评估转染效率。

4 TransIT-X2®在包括原代细胞在内的多种细胞类型中都具有较高转染效率

 

A screenshot of a video game Description automatically generated

使用TransIT-X2®(Mirus Bio)、Lipofectamine®2000 (Thermo Fisher Scientific)Lipofectamine®3000 (Thermo Fisher Scientific)转染荧光素酶编码质粒DNAA549 (A)MDCK (B)细胞中,转染24小时,通过荧光素酶活性评估转染效率,定量受损细胞中释放的LDH评估细胞毒性。与Lipofectamine®2000Lipofectamine®3000的细胞相比,在最佳试剂:DNA比例下,Trans - x2®有着更高的荧光强度及更低的细胞毒性。

5 相较于使用单一组分且形成阳离子脂质体复合物(liposome)Lipofectamine®系列转染试剂,TransIT-X2®有着更高的转染效率及更低细胞毒性

 

实验Tips: 针对更多特定细胞类型,试剂使用建议,详细请见:Cell-type specific transfection protocol recommendations (PDF).

 

 

Mirus TransIT-X2®RNAi干扰实验中性能数据展示

基因沉默相关功能研究在分子和细胞生物学中发挥着重要作用,化学转染也在该研究领域扮演者重要角色。常见参与RNAi干扰途径的天然RNA分子包括:

-      小干扰 RNA (Small interfering RNAs, siRNA) :由双链 RNA(dsRNA)断裂所产生的短双链 RNA(20-25bp)

-      微小 RNA(MicroRNAs, miRNAs) :非编码 RNA 处理后所产生的一类短的、单链 RNA(20-22nt)。

利用 RNAi 抑制基因表达的另一种方法为短发夹 RNA(short hairpin RNA , shRNA),这些短 RNA 序列可通过病毒或非病毒载体方式进行表达,更多详细信息可查阅Mirus Applications | RNAi Gene Silencing。

 

Illustration highlighting siRNA, shRNA and miRNA mediated pathways

6  不同RNAi干扰途径示意图

 

A graph of different colored bars Description automatically generated

TransIT-X2®Dynamic Delivery SystemLipofectamine®2000转染试剂用于转染siRNA(靶点为内源性蛋白质- GAPDHAHA1),对照使用正常人类真皮成纤维细胞(NHDF)递转非靶向siRNA。Trans IT-X2®加入量为4?l, Lipofectamine®2000加入量为6?l,siRNA加入量都为25 nM。使用qRT-PCR相对于18s rRNA水平测量GAPDHAHA1 mRNA进行检测,转染后48小时均一化至非靶向对照组的mRNA水平,误差则为三次复孔实验的标准差。

基于siRNA核酸递转类型的基因沉默研究,相比Lipofectamine® 2000,TransIT-X2®有着更高的基因沉默效率

 

 

A graph of different colored bars Description automatically generated

TransIT-X2®Dynamic Delivery SystemLipofectamine®2000转染试剂用于转染Pre-miR? hsa-miR-1 miRNA Precursor 或者mirVana? miRNA mimic, miR-1 (两者都已验证,可降低PTK9 mRNA表达水平)。Pre-miR?阴性质控用于评估mRNA表达水平基线值。Trans IT-X2®Lipofectamine®2000试剂加入量3?l, 加入50 nM miRNA。使用qRT-PCR相对于18s rRNA水平,经过阴性质控的均一化,得到PTK9 mRNA表达水平。

基于miRNA (miRNA PrecursormiRNA mimic)基因沉默研究,相比Lipofectamine® 2000,TransIT-X2®有着更高的基因沉默效率

 

 

Mirus TransIT-X2®CRISPR基因编辑实验中性能数据展示

经过改造及优化的细菌 CRISPR/Cas9 系统,已被广泛应用到哺乳细胞的基因编辑中。基于CRISPR基因编辑实验常见两组分:Cas9蛋白及引导RNA(gRNA)。当Cas9蛋白切割了靶向基因组DNA,会触发两种内源性修复机制,即非同源末端连接(NHEJ)和同源定向修复(HDR),以应对细胞中产生的DNA断裂。基于NHEJ细胞修复通路,为非精准、且容易出错细胞修复通路,可引入导致基因功能缺失的Indel。基于HDR的细胞修复通路,则需要额外的同DNA 作为修复模板,从而实现精准修复,在目的基因插入特定的基因或长片段序列。

CRISPR Handles Multiple Types of Genome Modification Illustration

根据研究者们不同的实验需求,CRISPR基因编辑可以有多种类型实验设置,这意味需要面对不同核酸类型的转染甚至共转染,举例如下:

1.      质粒pDNA转染

作为CRIPSR实验关键两组分:Cas9蛋白及gRNA,可以设计单个质粒DNA,共同表达两组分(A);或者使用两质粒系统,其中一个质粒表达Cas9蛋白,另外一个质粒表达gRNA(B)使用Cas9切口酶(Nickase),则需要两条gRNA,这时可能需要三质粒系统的递转实验。

CRISPR Plasmid Delivery Approaches Illustration

2.      质粒DNARNA寡核苷酸共转染

此时,与上述实验设计不同的是,gRNA以寡核苷酸形式进行递转,这就意味着递转实验需要同时转染质粒DNA以及RNA寡核苷酸(AB)。

CRISPR Plasmid and gRNA Delivery Approaches Illustration

3.      mRNARNA寡核苷酸共转染

为了避免由于质粒DNA基因组整合而导致的脱靶效应,可以共转染编码Cas9蛋白的mRNAgRNA (RNA寡核苷酸)。

CRISPR mRNA and gRNA Delivery Approaches Illustration

4.      Cas9/gRNA RNP复合物递转

随着Cas9蛋白及gRNA商品化趋于成熟,越来越多的研究者们选择直接从第三方购买高保真Cas9蛋白,以及有着额外化学修饰在细胞内更稳定的gRNA寡核苷酸。除了极大的缩短和简化CRISPR实验流程外,相对于质粒或者mRNA方式合成,直接递转RNP复合物的方式有着更高的特异性及编辑效率。

CRISPR RNP Delivery Approach Illustration

实验Tips: 针对上述不同CRISPR实验设计及递转情形,TransIT-X2® Dynamic Delivery System优化的具体实验说明, 下载链接如下:

TransIT-X2® for CRISPR Plasmid + gRNA Delivery (PDF)
TransIT-X2® for CRISPR Plasmid Delivery (PDF)
TransIT-X2® for CRISPR RNP + ssODN Delivery (PDF)
TransIT-X2® for CRISPR RNP Delivery (PDF)

使用TransIT-X2® Dynamic Delivery System  (2 ?l/孔,24孔板, Mirus Bio)共转染0.5 ?g质粒DNA(表达Cas9蛋白)50nM 2-part gRNA (PPIB基因)HEK293T/17, U2OS NHDF细胞中,转染后48小时,T7E1验证切割效率。

9 质粒DNAgRNA寡核苷酸共转染:TransIT-X2®分别在293T/17、U2OSNHDF细胞中共转Cas9质粒DNAgRNA(RNA寡核苷酸),都有着较高的基因编辑效率(18-48%)

 

A close-up of a dna test Description automatically generated

2-part gRNA (PPIB基因,IDT) Cas9 蛋白(PNA Bio)形成RNP复合体,分别使用TransIT-X2® Dynamic Delivery System(1 ?l/孔, Mirus Bio)、Lipofectamine® CRISPRMAX? (1.5 ?l/孔, ThermoFisher) 、Lipofectamine® RNAiMAX (1.5 ?l/, ThermoFisher) 、Lipofectamine® 3000 (1.5 ?l/ThermoFisher) 递转至293T/17U2OS细胞中。测试gRNA两种使用量(6 nM12 nM),相同Cas9 蛋白加入量(6 nM),转染后48小时,T7E1验证切割效率。

10 Cas9/gRNA RNP复合体递转:相较于Lipofectamine®系列转染试剂,TransIT-X2®有着更高的切割效率

 

 

Mirus TransIT-X2®产品优势

?新型基于多组分开发的广谱型转染试剂(适用于多种细胞,包括难转细胞)

? 同时转染核酸及蛋白,包括不限于DNA,siRNA/miRNACRISPR/Cas9复合物

?不形成脂质体复合物,降低细胞毒性;

? 满足多种应用:基因过表达、基因沉默、基因编辑、干细胞研究、稳转细胞株构建等。

 

相关产品信息

产品名称

规格

货号

TransIT-X2® Dynamic Delivery System

1 × 0.3 ml

MIR 6003

1 × 0.75 ml

MIR 6004

1 × 1.5 ml

MIR 6000

5 × 1.5 ml

MIR 6005

10 × 1.5 ml

MIR 6006

 

 

文末福利:

关注西美杰微信公众号“xmjsci”,回复关键词X2试用,填写信息即有机会免费获取100μl TransIT-X2®转染试剂试用装。试用成功后还可享优惠折扣购买TransIT-X2®正装哦,快来试用抢购吧!

美国Mirus电子娱乐网站成立于1995年,是世界上很早开发高效、低毒转染试剂的电子娱乐网站,同时也是目前该类试剂主要的供应商之一。Mirus被公认为转染试剂开发的领跑者,其许多杰出成果获得世界公认与广大用户的好评。

电子娱乐网站是Mirus中国区代理,始终秉承着专业、严谨的态度为客户提供优质的产品与服务。如果您对上述产品感兴趣,欢迎致电北京西美杰客服热线400-050-4006或登录网站www.xmjsci.com了解更多产品信息。

 

在线客服

电子娱乐网站的营业时间: 8:30-17:30

  •   北京客服1
  •   北京客服2
  •   上海客服
  •   成都客服
  •   广州客服
给大家科普一下十大电子娱乐网站网上(2024已更新(今日/知乎)